Addgene의 AAV 정제 프로토콜을 소개합니다. 

AAV 연구에서 가장 많이 사용되는 정제 방법 중 하나는 Iodixanol Gradient Ultracentrifugation입니다.

이 방법은 어떤 serotype의 AAV라도 안정적으로 정제할 수 있으며, 안전성과 효율성 면에서 연구자들에게 널리 인정받고 있습니다.

왜 Iodixanol일까요? 

1)비독성 & 세포 친화적: 포유류 세포에 무해하여 바이러스 정제 후에도 제거할 필요가 거의 없습니다. 

2)다양한 활용 : 바이러스뿐 아니라 세포, 소기관, 지질단백질, 고분자 분리에 활용 가능합니다. 

3)고효율 분리 : 밀도 차이를 이용해 **빈 입자(empty capsid)**와 오염물질을 제거하고 유전체가 포함된 완전한 AAV를 농축합니다.

정제 과정의 핵심 포인트 : Iodixanol Gradient

17% 층 : NaCl 첨가 → 비특이적 결합 억제

25% / 40% 층 : 빈 입자 및 저밀도 오염물 제거

60% 층 : 완전한 AAV 입자를 받아내는 쿠션 역할

* Phenol Red : 층을 명확히 구분해 시각적 편의 제공

결과적으로 Full particl이 풍부한 AAV 프렙을 확보합니다.

(평균적으로 약 80% full particle, 20% empty particle)

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